...组dna进行pcr啊?比如说是苹果树的dna。我刚开始学pcr,请详细教一下...

发布网友 发布时间：2024-10-24 15:05

我来回答

共2个回答

热心网友 时间：2024-11-10 06:21

首先看你研究的基因组是不是已经测序了，如果是的话就方便了，去NCBI的FTP数据库下载基因组序列或者选择genome数据库输入名称就能查到，FASTA格式保存。推荐前一种方法，可以下载.gbk文件，里面有所有已知基因的注释，用记事本就能打开看。再设计引物，FTP在首页最下面。如果研究未测序物种，就从同源性较高的其他物种寻找类似基因进行测序，以纤维素酶基CesA因为例，我原来克隆过这个，先从模式植物水稻中找到这个基因序列设计引物，当然如果在水稻或其他物种中已有人克隆了这个基因就可以直接用他的引物，因为同源性高一般来讲容易成功。其实最主要就是明确要克隆哪个基因，然后找到序列就能设计，或者用别人的引物，自己加以改进。至于引物设计软件比较权威的就是Primer Premier 5和oligo，前一种比较简单容易上手，后一种功能非常强大，稍微复杂一些，根据情况选择，当然如果不想动脑筋现在也有很多在线设计程序，谷歌一下就能搜到，把目标序列输进去默认参数点GO就OK了。其实设计引物也是一门技术活，有很多法则，网上也能找到。设计的好事半功倍，至于PCR其实没什么好学的，多做几次就会了，后面就是熟练的过程，等的时间比做的时间多。还有一点就是一般做真核生物通常都是提RNA反转cDNA来做，这样避免了内含子，因为真核生物内含子还是占了相当大的部分。得到外显子后其实就可以了，如果真的要完全克隆也可以用genewalk等特殊的酶来做，我也很久没做了，可能现在试剂更好了呵呵。

热心网友 时间：2024-11-10 06:21

首先你要知道你想要克隆的是什么基因，然后到基因bank里查与它相近物种这种基因的序列，然后设计引物，之后就可以进行pcr了